广东惠州地区罗非鱼链球菌病的分离、鉴定及药敏分析

2023-12-15 12:49| 发布者: 《海洋与渔业》| 查看: | 评论: 0

　　作者：广东省惠州市水产技术推广站陈冰玲余清华董永宏
　　　　　广东省惠州市海洋与渔业科学技术研究中心李庆勇张志敏/文图

　　近年来，广东省惠州地区罗非鱼链球菌病发病率居高不下，病鱼早期症状不明显，到中期治疗难，严重影响了罗非鱼养殖效益，给惠州水产养殖业造成了重大经济损失。

　　2014年7月~10月，惠州市水产技术推广站在全市范围内开展了罗非鱼链球菌病流行性调查，旨在找出惠州地区罗非鱼链球菌病发病原因及安全有效的药物，为生产中有效防治该病提供依据，促进惠州水产养殖业健康发展。

　　一、材料与方法

　　1．试验材料
　　罗非鱼病样采自惠州地区罗非鱼养殖密集区：惠城区小金口镇、仲恺高新区潼湖镇、潼侨镇、博罗县杨村镇、惠阳区平潭镇，共13个养殖场，合计采集罗非鱼87尾，体重20g~700g。脑心浸液购自青岛高科园海博生物技术有限公司，血平板购自广东环凯微生物科技有限公司；药敏片（抗生素类药物）购自杭州天和微生物试剂有限公司。

　　2．病原菌分离与纯化
　　病鱼常规检查记录后，无菌条件下在病鱼脑、后肾、肝、腹水等处取样，划线接种于血平板上，37℃培养16h后，挑取单菌落进行纯化培养，观察溶血性，用保鲜膜包装后放入冰箱4℃保存备用。

　　3．病原菌鉴定
　　按常规方法对分离纯化后的细菌进行革兰氏染色，观察染色特性及细菌形态。使用法国梅里埃ATB细菌鉴定仪对分离到的菌株进行生化鉴定。

　　4．药敏试验
　　挑取单个菌落至装有BHI液体培养液的摇菌管中，37℃，180rpm培养14h后，取100微升菌液至血平板上，涂布棒涂匀后贴上药敏纸片，37℃培养24h后测量抑菌圈直径。根据药敏试纸抑菌环直径判断标准判断药物敏感度。

　　二、结果与分析
　　
　　1．罗非鱼链球菌病主要症状及病原菌分离结果
　　通过对惠州5个乡镇的采样调查发现，大部分发病罗非鱼眼浊，突起；胸鳍基部、腹部及肛门发红；鳃丝发黄粘连。剖检可见，肝脏颜色变淡，软化，胆囊肿大；肠道发炎；腹水多、脂肪多（见图1、2、3）。从采样的89尾鱼中有73尾感染无乳链球菌，按症状分，50尾有明显临床症状或濒临死亡，23尾（鱼苗较多）体表健康，无明显病症；按分离出的细菌溶血程度分30%呈高度溶血、50%呈微溶血、20%不溶血；按菌种数量分，70%只感染链球菌1种菌，30%在感染链球菌的同时还感染了其他细菌，如嗜水气单胞菌。
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　　2．药敏试验结果
　　综合73株病菌药敏试验结果分析可见，不同鱼塘病菌对28种药敏片的敏感程度不同，经统计，敏感比例：头孢克洛＞氨芐西林＞米诺环素＞头孢噻吩（先锋Ⅰ）=庆大霉素=氧氟沙星；中度敏比例：氧氟沙星＞头孢哌酮＞米诺环素＞乙酰螺旋霉素；耐药比例：林可霉素＞苯唑西林＞四环素＞青霉素G，详见表1。
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　　三、讨论

　　1．早期发病的鱼无明显症状
　　通过本次调查发现，一些体表正常无明显症状的罗非鱼（多为鱼苗）也会感染链球菌病，细菌培养溶血性高。由于该病一旦出现明显症状治疗起来比较困难，治愈率低，因此，提前预防、早发现、早治疗对降低该病死亡率起着重要的作用。提醒鱼苗放养前应彻底清塘，充分暴晒。

　　2．病原分离多种菌株
　　在本次试验中，73尾鱼感染病菌，其中70%的病鱼只感染链球菌，30%的病鱼在感染链球菌的同时还感染了嗜水气单胞菌等细菌。虽然没有对这些细菌进行回归感染试验，但在惠州多个乡镇同时发现此类情况，从而提醒在预防罗非鱼链球菌病时，应同时注意控制其他病害的入侵。通过重点调节水质，提高饲料营养等方式，综合预防罗非鱼细菌性疾病的发生。

　　3．不同鱼塘的鱼对药物敏感不同
　　试验发现，不同鱼塘分离到的病菌对药物敏感程度不同。例如头孢克洛，在本次被采样的13个养殖场中，除仲恺高新区潼湖镇某养殖场的罗非鱼链球菌对该药耐药外，其它12个养殖场均呈现出中度敏感或高度敏感。药物对病菌的敏感程度同时也受养殖环境、养殖方式和鱼苗选择影响。在用药时，建议轮换使用不同药物，避免长期应用某一种药物而造成耐药。

　　本次罗非鱼链球菌病药敏试验主要针对抗生素类药物。应用抗生素治疗鱼病虽容易造成耐药，但由于目前疫苗尚未普及，中草药抑菌的研究仍需进一步研究，就目前应用前景来说，本试验结果可以为罗非鱼链球菌病的预防和治疗提供参考。

广东惠州地区罗非鱼链球菌病的分离、鉴定及药敏分析

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